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顯微成像平臺

冷凍掃描電鏡(Cryo-SEM)

儀器型號

Hitachi Regulus8100,Sigma 300;Zeiss Gemini 300; Hitachi S4800;JSM-7800F;蔡司 Supra 55等

預約次數:36058
新客專享:首單立減200元
測試收費:溝通
詳細介紹
 
項目介紹
 
   冷凍掃描電鏡(Cryo-SEM)是一種先進的電子顯微鏡技術,專門設計用于觀察那些在常溫和常規脫水條件下易受損或變形的樣品。該技術通過快速冷凍樣品至極低溫度(通常低于-150℃),使得樣品內部水分迅速形成非結晶的玻璃態,從而有效保留其原始三維結構。樣品經過超低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣(噴金/噴碳)等處理后,通過冷凍傳輸系統放入電鏡內的冷臺(溫度可至-185℃)即可進行觀察。 可實現直接觀察液體、半液體及對電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。
    冷凍掃描電鏡的工作流程大致如下:
1. 樣品制備:首先,將樣品快速冷凍,一般采用液氮或其他冷凍設備瞬間冷卻至低溫狀態,以確保樣品結構的瞬時固定。
2. 冷凍斷裂(可選):某些情況下,可能需要在冷凍條件下對樣品進行斷裂,以便觀察內部結構。
3. 升華去除水分:樣品隨后進入冷凍制樣室,在高真空環境下進行升華處理,即讓固態冰直接轉化為氣態,去除樣品表面的冰層。
4. 鍍膜處理:為了提高樣品的電子散射能力并在觀察過程中減少電子束造成的荷電效應,通常會對冷凍樣品進行鍍膜,如噴金或噴碳。
5. 低溫傳輸與觀察:最終,通過冷凍傳輸系統將樣品保持在低溫狀態下轉移到掃描電鏡樣品室內的冷臺上(溫度可維持在-140℃至更低),在這樣的低溫環境中進行觀察和成像。 
 
樣本要求
 
1.樣本寄送要求:
冷凍掃描電子顯微鏡,意在保持樣品鮮活程度,減少因常規前處理導致的皺縮形變,并允許含水量豐富的樣品上機。寄送時應根據不同觀測目的和樣品分別選擇相應寄送方法。
1)鮮活植物:建議有條件的可以連盆帶土寄送。樣品太大可以裁剪出觀測目的附屬周邊的植物組織一同寄送(比如觀測根就多裁一些,帶上一些莖組織,盡量拖延失水時間)
2)含水量豐富樣品,凝膠,乳液等 :分裝到2ml離心管直接寄送
3)鮮活動物(例如螞蟻,蚊子等):快速滅活后戊二醛固定寄送
4)大型動物組織(例如小鼠等實驗動物):裁剪合適大小后用戊二醛固定好寄送
5)新鮮果實,肉類等:運輸條件和機時允許下可以低溫寄送。 如條件不滿足則戊二醛固定后盡快送測。特別注意:如樣品沒有特殊溫度需求,不建議干冰寄送
2.服務周期:
一般為樣品接收后的1-2周左右,如遇法定假期需要順延,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
3.交付內容:
每樣提供8張拍攝圖片(不提供分析服務),如需照片數量超過將產生額外費用; 結果反饋請在測試完成一周內,不建議回收樣品,如有需要請提前反饋給e測試工作人員。
 
結果展示
 
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常見問題
 
 





question
1、冷凍掃描電鏡樣品的具體處理流程?
(1)將樣品滴加到冷凍掃描專用樣品托;
(2)快速投入液氮中冷凍:將裝有樣品的樣品托投入液氮雪泥中速凍30s后,使用低溫冷凍制備傳輸系統在真空狀態下將其轉移至樣品制備腔室進行升華鍍金處理。
(3)升華和鍍金:樣品在- 90℃升華10min之后以10 mA的電流濺射鍍金30-60 s,送入掃描電鏡樣品室觀察,冷臺溫度-140 ℃,加速電壓 5 kv。
question
2、為什么相同的放大倍數會顯示不同長度的標尺?
電鏡設備是自動匹配標尺,不是人為控制的。比如同樣是3萬倍,有時候是3微米的標尺,有時候是4微米的標尺,無法人為控制,也不能另導出不帶標尺的圖片。
question
3、電鏡圖像的標尺與放大倍數的關系?
電鏡圖像的標尺通常都可以設定為固定的或可變的。前者是標尺的長度不變,但代表的長度隨放大倍率變化;后者是標尺長度適應不同階段放大倍率可變,但代表的長度在一定的放大倍率范圍內固定不變。
因此同樣的放大倍率可以有不同的標尺,但在同一輸出媒介上的實際尺寸不變。改變輸出方式時,放大倍率已改變(當然顯示的放大倍率不會變化),測量的尺寸當然也就改變了。標尺數值的大小跟放大倍數沒有必然關系,具體數值大小和不同的儀器廠商設置有關。如同樣是3萬倍,有時候是3微米的標尺,有時候是4微米的標尺,無法人為控制,也不能另導出不帶標尺的圖片。
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